上海紀革森實業有限公司

生物指示劑D值在滅菌驗證時要測定么？

  生物指示劑是一種對特定滅菌程序有確定及穩定耐受性的特殊活微生物制成品，可用于滅菌設備的性能確認，特定物品的滅菌工藝研發、建立、驗證，生產過程滅菌效果的監控，也可用于隔離系統和無菌潔凈室除菌效果的驗證評估等。

  D值即在規定滅菌溫度下（如121℃），將生物指示劑產品中耐熱微生物殺滅90%（下降一個對數單位）所需的時間。D值越大，耐熱微生物殺滅速度越慢，該菌株的耐熱性越強。

滅菌驗證一定要測定待滅菌產品中生物指示劑的D值嗎？

  根據《化學藥品注射劑滅菌和無菌工藝研究及驗證指導原則（試行）》要求，“針對具體的滅菌工藝和具體的產品，還應注意所用的生物指示劑的耐受性應強于待滅菌產品中的污染菌”。“由于生物指示劑在不同介質或環境中的耐受性會有所不同，所以無論是將生物指示劑接種到待滅菌產品的方法，或直接使用市售的生物指示劑成品，均應考慮待滅菌產品對細菌芽孢耐受性的影響，如果待滅菌產品會使芽孢的耐受性增加，應采用直接接種到待滅菌產品的方法。如果生物指示劑與產品不相容，可以用與產品相似的溶液來代替產品。使用市售生物指示劑時，應確保生物指示劑的 DT值和總芽孢數等主要質量參數的準確性”。

  根據20版中國藥典附錄《9207滅菌用生物指示劑指導原則》要求，“生物指示劑的初始微生物的數量、耐受性(菌體耐受性)和放置的位置、方式等情況都會影響其滅活效果。在濕熱滅菌工藝中，生物指示劑的使用是通過生物學的方法來驗證其滅菌效果，只要D值足夠，即使初始微生物數量低于100000，使用生物指示劑仍然可以驗證其滅菌效果。對濕熱滅菌耐受性差的物品，其無菌保證應通過比較生物指示劑與物品滅菌前微生物的污染水平(耐受性及微生物污染數量)及滅菌程序驗證所獲得的數據進行評估”。

  再次，從滅菌驗證的操作過程來看，不同的暴露時間、放置區域、指示劑類型（載體型、芽孢懸液型、自含型）、芽孢菌種（如嗜熱脂肪地芽孢桿菌，生孢梭菌、枯草芽孢桿菌等）、指示劑純度和均勻性、培養基等均會影響滅菌后存活孢子計數結果的準確性。實驗操作：產品在121℃下滅菌，設計不同的暴露時間(如8min\12min\14min等)，覆蓋全部陽性反應、全部陰性反應和部分陽性、陰性反應的區間（如熱點、冷點區域等）。每個暴露時間點所用的待測生物指示劑樣品為20支，每次暴露的樣品批次和數量相同。每次暴露程序完成后，立即按壓玻璃管，使培養基與含菌紙片充分接觸，55℃培養48h，記錄陽性/陰性反應。計算存活孢子計數結果。

  微生物到底在什么樣的介質中耐受性會增加？根據經驗，介質成分和pH值等均會影響微生物的耐受性，如某些酵母菌在pH值4-5時耐熱性增加，有些芽孢在低濃度鹽溶液中、高濃度的糖溶液中，耐熱性增加。

  從上可知，由于生物指示劑在不同介質或環境中的耐受性會有所不同，因此選擇生物指示劑時，需要考慮應考慮待滅菌產品對細菌芽孢耐受性的影響。如測定生物指示劑中芽孢在待滅菌產品中的D值，如果耐熱性增加，則需直接接種到待滅菌產品的方法進行驗證。這在一些鹽類產品中特別需要注意。